Urobilin, Urobillinogen

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Urobilin, Urobillinogen

작성자 닥터코리아 조회수 4029

【 Urobilin 】


1. Schlesinger test

시험관에 요 5ml를 넣은 후 Lugol 액 2∼3방울을 가해서 10분간 방치하면 chromogen이 색소로 변한다.
Saturated absolute alcoholic acetate solution (무수 alcohol에 초산아연을 포화시킨 용액) 5ml를 혼합한 후 여과해서 녹색형광의 유무를 본다.

Bilirubin이 있을 때는 calcium hydoxide로 침전시킨 후 여과하여 그 여액으로 검사한다.
Urobilin의 양이 많을 때는 황색을 보인다.

2. Schlesinger reagent
무수 알콜 100ml 당 2.33g의 zinc acetate를 용해시켜 포화용액을 만든다.

3. Lugol 액
iodine.......................5g
potassium iodide.....10g
distilled water......100ml

Urobilinogen은 공기 또는 광선에 노출되거나 Lugol액을 가하면 urobilin이 된다.
Urobilin은 대변의 stercobilin과 같은 것으로 생각된다.


【 Urobillinogen 】

요를 통해서 하루에 4mg정도의 urobilinogen이 배설되는데, 담관폐쇄 같은 때는 감소하고, 용혈성 빈혈 때는 많아진다.

간실질에 손상이 생기는 간염의 경우엔 간세포가 sinusoid의 혈액 중에서 urobilinogen을 잡아들여 이것은 bile 속에 배설하는 기능이 저하되므로 문맥에서 흡수된 urobilinogen은 그대로 대순환으로 많이 빠져나간다. 따라서 요에서 배설되는 양이 많아진다.


〔 정성검사법 〕

Wallace-Diamond test
: Urobilinogen과 para-dimethylaminobenzaldehyde가 섞이면 진분홍 cherry-red의 정색반응을 일으키는 것을 이용한 것.

Urobilinogen은 공기 중에 노출되면 쉽게 산화되어 urobilin이 됨으로 요가 신선할 때(4시간 내) 끝낸다.
Urine 10ml에 Ehrlich의 aldehyde reagent 1ml를 가하고 잘 섞는다.
Urobilinogen이 많으면 진분홍색이 나타난다.
색의 관찰은 tube를 백지 위에 세우고, 위에서부터 밑으로 관찰한다.

Ehrlich 의 aldehyde reagent

para..dimethylaminobenzaldehyde.................0.7g
conc. HCL ..........................................................150ml
distilled water.....................................................100ml

(주의사항)
a) Formalin이나 methenamine (urotropin)은 이 반응을 방해한다.
b) Acetone, antipyrin도 비슷한 색을 나타낼 수 있다.
c) Bile이 있으면 solid calcium hydroxide로 침전시키고 여과한다.
여과액으로 bilirubin 검사를 해서 계속 있으면 calcium hydroxide를 넣어 다시 여과한다.
d) Ehrlich 시약은 sulfonamide류의 방향성 amine, indole, indican, 채소류의 엽록소 대사산물 등과도 반응하여 위양성을 나타낸다. 세균으로 인해 생기는 요중 nitrite 때문에 위음성을 나타낼 수도 있다.
e) Porphobilinogen ; 적색을 나타내기는 하지만, chloroform에 용해되지 않는다.
f) Para-aminosalicyhic acid를 사용할 땐 혼동을 가져온다.
g) Sulfonamide와 novocain도 greenish yellow color를 나타낸다.


Ugen-test(Boehringer Mannheim Co.)

P-methoxybenzole diazonium fluoborate(p-MDFB)는 강한 산성 완충액 내에서 urobilinogen과 특이하게 반응하여 적색의 carmine dye를 형성한다.
Urobilinogen의 농도를 mg/dl로 나타낼 수 있다.

표준색조에 따른 추정농도는 다음과 같다.
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변색구간 urobilinogen(mg/dl)
------------------------------------
-negative <1
+ positive 1
++ 4
+++ 8
++++ 12
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〔 정량 검사법(Watson test) 〕

원리 : Ehrich aldehyde reagent를 이용하여 나타나는 정색을 pontacy1 색소를 쓴 인공표준액에 맞추어 spectrophotometer로 정량하는 방법. Sodium acetate를 가하는 것은 urea에 의한 황색 정색을 억제하기 위하여서이다.

① 하루 중에 가장 urobilinogen의 배설량이 많은 오후 2∼4시의 뇨를 체취한다.
② 2시간 뇨의 양을 측정한 후 2.5ml의 뇨와 Ehrlich 시약 2.5ml를 잘 섞고, 즉시 sodium acetate 포화용액 5ml를 가하여 혼합한다.
③ 별도로 blank에는 뇨 2.5ml에 sodium acetate포화용액 5ml를 넣어 섞은 후 Ehrlich 시약 2.5ml를 가한다. 이 때는 정색반응이 일어나지 않는다.
④ 파장 565nm으로 blank를 100% T에 맞추고, 가검뇨의 % T를 읽는다. 이 % T로 calibration curve에서 urobilinogen의 mg/dl를 구한다.
⑤ Watson의 2시간 뇨법에서는 urobilinogen의 배설정도를 Ehrlich unit(E.U.)로 표시하는데, 다음 공식에 의하여 산출한다.
mg/dlx4x 2시간뇨량(ml)/100 =E.U.

시약

a) Ehrlich의 aldehyde reagent : 정성시험에 쓰는 것과 같음.
b) Sodium acetate의 포화용액
NaC2H2O. 3H2O의 특급품 130g을 45°C정도의 온수 100ml에 섞어 용해시킨 상청액을 사용한다.
c) Stock standard 색소용액
pontacyl carmine 2B..........................5mg
pontacyl violet 6R ..........................95mg
0.5% acetic acid 로..............1000ml되게

기준 설정 ;
① Stock standard 20.4ml를 100ml의 volumetric flask에 취하고, 0.5%의 acetic acid로 눈금까지 채운다.
② 이 diluted standard와 0.5% acetic acid를 앞 표와 같이 혼합하여 각 농도에 해당한 기준액을 만든다.
③ 파장 565nm로 0.5% acetic acid를 blank로 하여 각 tube의 % T를 구한다. 이 %T로 calibration curve를 얻는다.

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tube 1 2 3 4
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urobilinogen(mg/dl) 0.6 0.4 0.3 0.15
dilute standard(ml) 16.35 10.9 8.17 4.08
0.5% acetic acid(ml) 3.65 9.1 11.83 15.92
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정상치 : 1 E.U.까지
1∼1.5 E.U.는 병적일 의심할 필요가 있고, 1.5 E.U.가 넘으면 분명히 병적이며, 전혀 검출이 안 되는 것도 비정상이다.